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導致色譜峰異常的可能原因

 常見引起色譜峰異常的因素有:

1.色譜柱連接管路不正確;2.連接件卡進柱子后客戶的處理;3.HPLC常用色譜柱接頭;4.色譜柱活化不到位;5.不同品質試驗用水導致鬼峰;6.柱溫的應用

 

     色譜柱連接管路不正確

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     連接件卡住后客戶的處理:

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  HPLC常用色譜柱接頭:

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  樣品:
               1.苯丙氨酸     2.5-苯基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸
               3.Asp-Phe      4.天冬甜素

色譜柱活化不到位:

新色譜柱和長時間不適用的色譜柱都建議活化

活化的重要性

  • 1)運輸或儲存過程中不可避免干涸掉的填料盡可能盡可能的浸潤,使填料恢復活性;

  • 2)不同品牌溶劑之間的差異,可能引起噪音增加,漂移增大,盡可能的置換掉保存溶劑;

  • 3)加大進樣量或者連續多次進樣的方式,屏蔽掉系統和柱子的活性點,避免對樣品峰形產生影響。

活化的注意事項:

  • 1)柱子中的保存液體與使用的流動相之間要互溶,如果不溶請使用中介流動相(異丙醇,或4-二噁烷等),由于中介流動相黏度大,請使用低流速;

  • 2)使用廠家推薦的活化程序;

  • 活化推薦步驟:

  • 反相柱(流速:0.5ml/min,每個步驟時間:120min):

  • 100%甲醇(或乙腈)—60%甲醇(或乙腈)—20%甲醇(或乙腈)——60%甲醇(或乙腈)—100%甲醇(或乙腈)

  • 正相柱(流速:0.5ml/min,每個步驟時間:120min)::100%甲醇(或乙腈):

  • 正相條件使用:

  • 正己烷—流動相

  • 反相條件使用:

  • 異丙醇—乙腈—60%乙腈

  • H型強陽離子交換磺化交聯苯乙烯-二乙烯基笨共聚填充劑:

  • PH=2.5硫酸水溶液,85℃,0.5ml/min,12小時以上。

  • 不同品質實驗用水導致鬼峰:

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